16世纪上半期，在查理五世执政期间，有不少西班牙画家赴意大利学习，意大利的人文主义思想从而也大大地冲击了这个伊比利亚半岛的国家。16世纪上半期塞维利亚画派是一个比较突出的画派，这个画派的代表人物有阿·费尔南德斯和巴尔加斯等人。阿·费尔南德斯( A. Fernandez,约1470-1543)的作品很富有生活和时代的色彩，他的《航海者圣母)(约1531)就是这样的作品。这幅画的画面中心是圣母，圣母周围有许多航海家和商人，前景是大海，海上有远航的船只，这好像在表明西班牙繁荣的海上贸易受到了圣母的保佑。在这个时期也有许多达·芬奇的追随者，其中最为著名的一个是瓦伦西亚画派的胡·德·华内斯( Jde juan约1523-1579)。华内斯的《最后的晚餐》和达·芬奇的同名作品十分相似，不过，他在人物的心理刻画上远不如达·芬奇，显然他比较重视外在情节上的描绘。另外一个瓦伦西亚画派的画家伊亚内斯·德·阿尔梅吉纳(E.Y. de Almedina,约1480-1537)也是达芬奇艺术的仰慕者。据说他曾作过达·芬奇的助手，他的艺术技巧很娴熟，水平不低，代表作有《参竭圣庙》、《圣卡特林娜)(约1520)等。
16世纪下半期，是腓力二世当政时期，他和他的父亲不一样，不大喜欢人文主义的思想和艺术，他一心想借助艺术来维护西班牙帝国的权威，他的艺术趣味比较保守，一心提倡严肃的宫廷艺术，于是在西班牙宫廷里流行起罗马主义艺术。当时在马德里宫廷里活动的画家，主要是阿·桑切斯·科埃里奥和巴道哈·德·拉·克鲁斯等人。阿·桑切斯·科埃里奥(A. Sanchez Coello,约1531-1588)是一位典型的宫廷肖像画家，他的作品虽然庄严肃穆，但还是比较重视人物的个性刻画，所以并不觉得呆板。他画的《唐·卡洛斯王子像)(1557)是一件很不错的作品，画面上的王子表现出种郁郁寡欢的样子，这个王子后来被其父亲所杀害。桑切斯·科埃里奥的学生巴道哈·德·拉·克鲁斯( Pantoja de la Cruz,1551-1608)也是一位比较出色的宫廷画家，擅作肖像画，代表作有《骑士唐吉也哥·德维里马约尔像〉、《腓力二世像》(1598)等。
16世纪下半期，除宫廷的罗马主义艺术外，在地方上也出现了样式主义的艺术。虽然西班牙的样式主义艺术受意大利的影响，但是也有区别，西班牙的样式主义艺术更多地带有宗教神秘主义的色彩。路易斯·莫拉列斯(L. Morales,约1510-1586)是西班牙最典型的样式主义画家。由于他的作品有神秘特色，所以有人把他叫作“神人”。从他所创作的一系列《圣母子)的作品中可以看到，人物的比例有点拉长，常常在圣母或圣婴的脸上表现出一种禁欲主义的表情。
